测试ID: JAK2V
JAK2V617F突变检测，各不相同

提取基因组DNA并对每个样本进行2次PCR反应。在每个反应中，基因组DNA的一个短片段，包括突变位点，通过实时荧光定量PCR仪(LightCycler 480, Roche)进行扩增。在第一个反应中，反引物的5'端碱基与突变序列匹配，PCR条件为只与突变DNA结合。在第二个反应中，反引物的5'端碱基与野生型序列匹配，PCR条件为只与野生型序列结合。在这两种反应中，PCR都使用TaqMan探针化学进行监测。每个样本的突变DNA和野生型DNA的数量都被测量。在每一次试验中，校准DNA样本中突变和野生型DNA的数量也会被测量。校正器是阳性细胞系(HEL)和阴性细胞系(HL60)的DNA混合物，以等量冷冻，并期望在每次运行中给出相同的结果。校准器结果的偏差被认为是由于运行条件的偏差，相应地对样品结果进行校正。在每个反应之后，使用LightCycler 480相对定量软件来计算归一化突变:野生型比率，用校正器数据校正后表示为无单位比率。

归一化比公式如下:

最终结果以百分比形式报告JAK2V617F总额的JAK2，即[突变/突变+野生型]x 100%，由归一化突变:野生型比率计算。(使用说明书:罗氏应用科学技术说明书编号:LC 13/2001。相对量化;LightCycler 480, 2006)

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