测试ID：DHRP
二氢血红素流式细胞仪，肉豆蔻酸酯醋酸福波试验，血液

慢性肉芽肿病(CGD)、x连锁和常染色体隐性形式、完全髓过氧化物酶(MPO)缺陷的诊断;监测嵌合和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶功能后造血细胞移植

评估移植前残留的NADPH氧化酶活性

x连锁CGD女性携带者的鉴定在雌性带菌者中，随着年龄的增长，离子化变化的评估

慢性肉芽肿病(CGD)是由编码烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶复合物的基因成分的遗传缺陷引起的。这些缺陷导致不能产生杀死细菌和真菌有机体所需的超氧阴离子。其他临床特征包括易发生全身性肉芽肿并发症和自身免疫(1)有5种已知的与CGD临床表型相关的遗传缺陷CYBB.该基因编码gp91phox蛋白，是x连锁的，约占CGD病例的70%。其他的基因缺陷是常染色体隐性的:NCF1(p47phox),NCF2（p67phox），Cyba.(p22phox),NCF4(p40phox)。典型的，x连锁CGD患者疾病最严重，而p47phox缺陷患者往往有最好的结果。突变NCF4编码p40phox蛋白是最近描述的（3），似乎与更少的感染较少的胃肠疾病相关。即使在NADPH氧化酶功能方面，甚至在具有相似突变的个体中存在显着的临床变异性，表明可以有几种调节因子，包括遗传缺陷，感染病史和肉芽肿和自身免疫并发症。似乎在非常低的NADPH超氧化物生产和更糟糕的结果之间存在相关性。CGD可以用造血细胞移植（HCT）治疗，可对炎症和自身免疫表现有效。

已经表明，CGD患者的存活与残留的反应性氧中间体（ROI）产生强烈相关，与特定的基因缺陷无关。（4）通过二氢胺（DHR）流式细胞术测定的NADPH氧化酶活性的测量有助于ROI评估。CGD的诊断实验室评估包括使用Nitroblue四唑鎓试验（NBT）或更具分析敏感的DHR试验的中性粒细胞中NADPH氧化酶功能的评估，如本文所述。用磷肌肌苷醋酸酯（PMA）的嗜中性粒细胞的激活导致DHR氧化至荧光化合物，罗丹明123，其可以通过流式细胞术测量。流式细胞术可以区分CGD的不同遗传形式。（5,6）完全髓过氧化物酶（MPO）缺乏可能导致DHR流量细胞术测定中CGD的假阳性结果（7）;然而，在PMA刺激后DHR +中性粒细胞和平均荧光强度（MFI）之间存在差异，这允许在真正的X链接CGD之间辨别并完成MPO缺陷。此外，添加重组人MPO在MPO缺陷的中性粒细胞中增强了DHR信号，但不在CGD中性粒细胞中。（7）

DHR流式细胞术的定量检测对于有效地用于不同形式的CGD的诊断以及hct后嵌合和NADPH氧化酶活性的监测至关重要。这些定量测量包括评估PMA刺激后DHR荧光阳性的中性粒细胞的相对比例(%)和激活后DHR对中性粒细胞的相对荧光强度(MFI)。

女性携带者X连锁CGD可以成为CGD症状由于倾斜lyonization (X染色体失活)。(8)与年龄相关的收购扭曲lyonization也会导致增加对感染的易感性在X连锁运营商CGD。(9)在这份报告而遗传突变更常见,也有新创的报道,散发突变CYBB.在母亲不是受影响等位基因携带者的男性患者中导致x -连锁CGD。此外，x -连锁CGD患者中有少量正常细胞群体的躯体镶嵌现象。(10)也有报道称女性携带者中有三体镶嵌现象(11,12)，以及成年女性中有晚发性疾病，她是由于新突变导致的躯体镶嵌现象CYBB.基因。（13）

因此，CGD的临床、遗传和年龄谱是多种多样的，中性粒细胞刺激后NADPH氧化酶活性的实验室评估，加上适当的解释，对于实现准确诊断或监测移植后患者是至关重要的。

报告将提供与年龄有关的中性粒细胞绝对计数的适当参考值。

除了临床信息中描述的定量值之外，将提供解释性报告。

定量二氢霍丹明(DHR)流式细胞仪检测结果的解释必须包括四溴十四酸酯刺激后DHR阳性中性粒细胞的比例和平均荧光强度。此外，DHR荧光模式的目视评估有助于鉴别与慢性肉芽肿疾病相关的各种遗传缺陷和完全髓过氧化物酶缺陷。

最好在抽血后24小时内检测标本，但其稳定性在采集后48小时内。标本采用肝素钠采集，并在严格的环境条件下运输。建议仅使用环境运输箱临界样品(T668)，以确保样品的适当运输。

溶血标本可提供较高的背景。ANC(绝对中性粒细胞计数)小于200的标本将不被接受。髓过氧化物酶(MPO)完全缺乏可产生假阳性结果。

Dihydrorhodamine（DHR）分析进行了评估157名健康供体，74名儿童和83名成人的中性粒细胞氧化爆发。

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