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病毒核酸由Magna纯自动化仪(Roche Application Science)从临床标本中提取。针对人疱疹病毒-6(HHV-6)立即早期基因的引物产生195bp扩增子。在PCR循环期间,浅循环仪(Roche应用科学)放大并监测退火步骤后的靶核酸序列的发育。这种自动化PCR系统可以快速(1小时)通过严格的空气控制温度循环和毛细管比色皿来检测扩增子开发。扩增产物的检测基于荧光共振能量转移(FRET)原理。对于FRET产品检测,3'-END上具有供体荧光团,荧光素的杂交探针通过外部光源激发,并发出由第二杂交探针吸收的光,其中受体荧光团,LC-RED 6405'-End。然后,受体荧光团发出不同波长的光,可以用与特定PCR产物的量成比例的信号测量。光环杂交探针设计用于对HHV-6的确切同源性。(Copperill fr III,UHL JR:实时PCR的应用和挑战用于临床微生物实验室。在快速循环实时PCR方法和应用中。由U Reischel编辑,C Wittwer,F Cockerill。柏林,德国,Springer-Verlag,2002 PP 3-30)
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