测试ID：HCVG
丙型肝炎病毒基因型，血清

样品制备：

Abbott MSample制备系统试剂盒与Abbott M2000SP一起使用，是使用磁性微粒方法的自动样品制备系统，以从人血清样本中提取和纯化病毒核酸。内部控制掺入核酸提取和纯化方法中，用于加工测定对照和临床标本。在捕获磁性微粒上捕获核酸后，洗涤微粒以除去未结合的样品组分。然后，将结合的核酸从微粒洗脱，并将洗脱液转移到含有PCR MasterMix试剂的96孔微量滴定板上，用于扩增和检测。

扩增，检测和基因分型：

ABBOTT实时HCV基因型II测定用于扩增丙型肝炎病毒（HCV）基因组的5'非分量（5'NC），非结构5B（NS5B）和核心区域，其优化以扩增的几种PCR引物组所有HCV隔离物。包括内部控制引物组以扩增南瓜植物的一部分羟基吡合他分还原酶基因，葫芦塔辣椒．试验的阳性对照是在阴性的人血浆中稀释的装甲RNA粒子。

在扩增反应期间，通过逆转录酶活性的静止转录酶活性，从靶RNA序列产生cDNA序列，通过恒温RTTH DNA聚合酶的逆转录酶活性产生。首先，HCV和内部控制反向引物退出它们各自的靶序列，并且在延长培养期间延长。在变性步骤之后，其中反应的温度升高在双链cDNA：RNA产物的熔点上方，第二引物退火到cDNA链中，并通过Rtth酶的DNA聚合酶进行延伸以产生双链DNA产品。在每一轮热循环期间，扩增产物在高温下解离单链，允许底漆退火和延伸，因为温度降低。产品的指数放大通过在高温和低温之间反复循环来实现，导致靶序列的十亿倍或更大扩增。对于每个样本的4个单独的反应孔中HCV基因型1至5的荧光探针和亚型1a和1b与扩增的序列产物退火。（包装插入件：Abbott Realtime HCV基因型II; Abbott Molecular Inc.，Des Plaines，IL，6/ 2013）

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