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该方法使用流式细胞术测量在活细胞表面表达的乙酰胆碱受体(ACHR)的损失。使用的细胞系是一种永生化的人横纹肌肉瘤细胞系,其表达其表面上的内源性肌肉型烟碱ACHR。细胞在96孔板中涂覆并在添加患者血清之前培养,然后在细胞上温育,以使抗体介导的ACHR的内化(调制)。
随后,然后停止调节,通过流式细胞术测量细胞表面上的ACR的量。使用对ACHR的人α-亚基特异的重组大鼠单克隆抗体进行受体检测,其次是与联霉素(APC)缀合的二次山羊抗大鼠IgG抗体。细胞表面上的ACR的量与APC的中值荧光强度(MFI)成比例。为了计算调制量(即,ACHR的损失),在用患者血清和用血清缺乏ACH调节抗体处理的细胞处理的细胞之间比较APC MFI。在每个实验中建立了背景信号,利用单独用二抗(没有患者血清)染色的细胞。ACHR损失损失百分比计算为1 - ([患者MFI-White MFI] / [否定校准器MFI-背景MFI] * 100%)。(未发布的Mayo方法)
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