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遗传系统HIV-1/HIV-2 PLUS O酶免疫分析(EIA)是基于直接抗体夹心技术的原理。微孔条板(固相)被纯化的HIV抗原包覆:从HIV-1中提取的gp160和p24重组蛋白,gp36肽代表HIV-2跨膜糖蛋白的免疫显性区域,以及模仿人工(不是由任何现有病毒编码的)HIV-1组o特异性表位的合成多肽。
血清样品和对照品随标本稀释剂加入微孔板的抗原包被孔中。样品稀释剂中含有一种染料,当与样品或对照品结合时,染料的颜色由紫色变为蓝色。水井要先孵化,然后清洗。下一步是加入含有过氧化物酶偶联抗原的有色共轭溶液(绿色)。然后将这些井进行孵化。如果HIV-1和/或HIV-2抗体存在,它将与孔上的抗原和共轭溶液中过氧化物酶偶联的抗原结合。在接下来的洗涤步骤中,抗原-抗体-抗原复合物仍然与井结合,这将去除任何未结合的物质。向板孔中加入工作色原溶液(TMB),并允许孵育。一种蓝色或蓝绿色的颜色与样本中HIV抗体的数量成比例。加入酸会使蓝绿色变成黄色,从而阻止颜色的显现。 The optical absorbance of specimens and controls is determined spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm.(Package insert: Genetics Systems HIV-1/HIV-2 PLUS O EIA. Bio-Rad Laboratories; 02/2019)
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